В области клеточной терапии эффективность и стабильность культивирования Т - клеток напрямую влияют на успех или неудачу клинического применения. В качестве двух распространенных носителей культуры 96 - и 6 - пористые пластины отличаются не только масштабами, но и ключевыми деталями регулирования микросреды клеток.

1. однородность клеточной вакцинации

Высокопроизводительные свойства 96 - пористой пластины требуют более точного распределения клеточной суспензии. Рекомендуется использовать многоканальный мигратор в сочетании с низкой скоростью центрифугирования (200 × g, 5 минут) для содействия оседанию клеток, избегая « пограничного эффекта», вызванного натяжением поверхностей жидкости в краевых отверстиях. В то время как 6 - пористая пластина имеет большой объем одного отверстия (2 - 4 мл), необходимо использовать « метод крестообразной качающейся пластины» для ручного усреднения, чтобы обеспечить равномерное распределение клеток.

2. Стратегия замены среды

96 - пористая пластина при полузамене жидкости легко возмущает прикрепленные к стенке клетки, может наклоняться под углом 45° медленно всасывать очищение; Если используется среда без сыворотки, необходимо предварительно добавить клей матрицы (например, Corning). ® Matrigel) Улучшенная наклейка. 6 - пористая пластина может быть заменена 50% питательной среды с помощью « градиентного метода жидкости», а затем полностью заменена через 24 часа, чтобы уменьшить клеточный стресс.

3. Оптимизация газообмена

При культивировании 96 - пористой пластины рекомендуется использовать крышку с воздухопроницаемой пленкой (например, Greiner Bio - One Cellstar). ®）， И контролировать укладку не более 3 слоев, чтобы избежать кислородной недостаточности в центральном отверстии. 6 - пористая пластина может быть помещена непосредственно в инкубатор для влажного смешивания, содержащий 5% CO2, но обратите внимание на расстояние между краем отверстия и вентилятором корпуса, чтобы предотвратить локальное чрезмерное испарение.

4. Методы фенотипического мониторинга

96 - дырочная пластина рекомендуется для многоточечного сканирования с использованием систем визуализации с высоким содержанием (таких как ImageXpress Micro), которые автоматически удаляют данные о помехах пузырьков с помощью алгоритма AI. 6 - пористая пластина лучше подходит для предварительного расширения перед потоковым разделением, при выборке рекомендуется использовать « метод диагональной пункции » с 1 - миллиметровой головкой пистолета вдоль диагонали три раза подряд, чтобы обеспечить репрезентативность образца.

А

А