Оптимизация эксперимента ELISA для снижения фонового шума является ключом к обеспечению точности данных. Ниже в сочетании с экспериментальным опытом, из закрытого, промытого, выбора антител и других основных звеньев, чтобы предоставить рекомендации по оптимизации:

Оптимизация закрытых условий

Закрытие является основным шагом к сокращению неспецифических комбинаций, и необходимо обратить внимание на следующие моменты:

‌ Выбор герметиков ‌: обычно используется 5% сывороточный альбумин крупного рогатого скота (BSA) или обезжиренное сухое молоко, в котором BSA подходит для большинства случаев, особенно когда образец содержит высокую концентрацию липидов или растворения крови, следует отдавать предпочтение BSA, чтобы избежать помех ‌ При обнаружении фосфатированных белков следует избегать использования обезжиренного молока, содержащего казеин.

Время закрытия с температурой: обычно комнатная температура закрывается от 30 минут до 2 часов или 4 ° C на ночь для повышения однородности. 37°C ускоряет реакцию, но нужно позаботиться о том, чтобы избежать испарения ‌

‌ Приготовление закрытой жидкости ‌: необходимо использовать в настоящее время, чтобы избежать повторного замораживания и таяния, приводящего к отказу ‌

Оптимизация этапов стирки

Полная стирка является ключом к снижению фона:

‌ Выбор моющей жидкости ‌: рекомендуется использовать буфер PBS, содержащий 0,05% Твен - 20 для удаления несвязанного вещества ‌

‌ Количество и время стирки ‌: рекомендуется промывать 3 - 5 раз по 2 - 3 минуты каждый, чтобы обеспечить удаление остаточного реагента ‌

Антитела и оптимизация реагентов

• Масса антител ‌: Выбирайте высокоспецифичные первичные и вторичные анти - и оптимизируйте кратное разбавление и время инкубации, избегая перекрестных реакций ‌

• Контроль проявления ‌: Разумно регулировать концентрацию и время проявительного реагента, чтобы избежать чрезмерного проявления, приводящего к повышению фона ‌

Другие меры предосторожности

· Количество белковых нагрузок: убедитесь, что загруженные белки имеют правильное качество, чтобы избежать чрезмерной нагрузки, которая приводит к неспецифическим связям ‌

• Экспериментальная среда ‌: Избегайте прямого яркого света, особенно на стадии проявления и обнаружения ‌