1.2.1.Структура антител

Антитела - это иммуноглобулины, которые связываются с антигенной специфичностью.(иммуноглобулин, ИГ)А.ИгПять категорий, а именно:ИгГАИГААИгМАИгДиИГЕСвязанные с иммунологическим анализомИгВ основном дляИгГиИгМА.ИгДве легкие цепи (LДве тяжелые цепи (H) Индивидуальный состав.ИгЛегкая цепь такая же, естьκ(каппа) иЛямбда(Ламбда) Два типа. Категория VИгТяжелые цепи имеют различную структуру, что определяет, что их устойчивость также различна.ИгГиИгМТяжелые цепи называютсяγ(гамма) Цепочки иμ(мю) Цепочка.

Тяжелые и легкие цепи.NПорядок расположения аминокислот на концах варьируется в зависимости от различных антител, называемых переменными областями, которые используются отдельноВХиВЛВыражение. Они образуют антигенные соединения антител, которые определяют кластеры только с соответствующими антигенамиВ сочетании, происходит специфическое связывание, является специфической антитело в сочетании со структурной основой антигена.

ИгГПапайя - протеаза распадается на три сегмента, два из которых называются антигенными связями (ФабВ)). каждыйФабВсе сохраняют способность связывать антигены, но только одинАнтигены связывают точки, которые являются моновалентными и не конденсируются или не осаждаются после соединения с антигенами. Другой участок называетсяФКСегмент, неактивный антитело, но имеетИгГ* Антигенность.

ИгГЕго можно разделить на два сегмента, один.ФабДвойное тело, называетсяF(аб')2Может связываться с двумя одинаковыми антигенами; Похожий фрагментФКЗатем они были разложены.Мелкие молекулярные полипептиды, не биологически активные.

ИгМОн состоит из пяти мономеров, содержащих 10Тяжелая цепь и10Легкая цепь, имеющая10Цена связывания антигенов, из - за влияния пространственного положения, проявляется только в пяти антигенных связях.ИгММолекулярная масса примерно900000А,ИгГМолекулярная масса примерно150000А.

Когда организм заражается микробами, он начинает вырабатыватьИгМАнтитела, которые затем вырабатываютсяИгГАнтитела. Через некоторое времяИгМКоличество антител постепенно уменьшается и исчезает.ИгГАнтитела могут сохраняться длительное время и сохраняться в течение нескольких лет после болезни *Долго.

ИгМАнтитела, как правило, являются защитными и иммунными. поэтомуИгМОпределение антител имеет высокую клиническую диагностическую ценность для некоторых инфекционных заболеваний, таких как гепатит А. Справа - гепатит А.В сыворотке больногоИгГАнтитела иИгМВремя и уровень появления антител.

1.3Антигенная реакция

1.3.1可逆性

Процесс связывания антигена с антителом для формирования антигенного антителочного комплекса представляет собой динамический баланс, который реагирует следующим образом:

Ag+AbAg·Ab

Сопротивление антителам (аффинитетЭто внутренняя связь между антигенными антителами, которая может быть использована с константой равновесияKВыражение:

К=[Ag·Ab]/[Аг] [Аб]

Аг·АбСтепень разложения иKЗначения связаны. Точки связывания антигенов с высокоаффинными антителами и детерминированные кластеры антигенов очень подходят в пространственной конфигурации, и их сочетание является прочным и нелегко разрезать. РасшифровкаПоследующие антигены или антитела сохраняют свою первоначальную структуру и активность, поэтому их можно очищать аффинной хроматографией. В антисыворотке специфическиеИгГАнтитела составляют всегоИгГчжунМинимальная часть. Специфические антитела, извлеченные с помощью аффинной хроматографии, называемые аффинными чистыми антителами, могут быть лучше использованы для иммунологической диагностики.

1.3.2Соответствующая пропорция Zui

Количество аддитивных антигенов, образующих антитело - комплекс (осаждение), добавляется к постоянному количеству антител1 - 4. Пиковая часть кривой является подходящим диапазоном для соотношения антигенных антител zui, называемых эквивалентными поясами (зоны эквивалентностиВ)). До и после эквивалентных полос образуются зоны избытка антител и антигенов соответственно. Если антиген или антитело крайне избыток, то осадок не образуется, в иммунометрииЭто явление называется (феномен зоныВ)). Избыток антител называется передним поясом (презона), избыток антигенов называется задней полосой (почтовой зонеВ)). Иммунологическое определение.На первоначальном этапе в реакционной системе должно быть достаточное количество антител, иначе измеренное количество будет меньше фактического содержания или даже ложноотрицательного.

1.3.3Специфичность

Соединение антигенных антител происходит, по сути, только между антигенными детерминантами антигена и антигенными связями антител. Поскольку они дополняют друг друга в химической и пространственной конфигурации, антигенАнтитела обладают высокой степенью специфичности. Например, поверхностные антигены в вирусе гепатита В (HBsAg),eАнтиген (HBeAg) и основные антитела (HBcAg(С одним и тем же вирусом, но только с соответствующими ему антителами, не с двумя другими антителами)Реакция. Эта особенность антигенных реакций позволяет иммунометрии определять конкретное вещество в очень сложном белковом соединении (например, в сыворотке крови) без предварительного выделения испытуемого.А.

Но и эта особенность не является. Если оба соединения имеют частично одинаковую структуру, перекрестные реакции могут возникать при реакции антигенных антител. Например, гормон гонадотропин (hCGЖелтые тела вырабатывают гормоны (ЛХ) Все изаибетаСостав двух субединиц, структура которых отличаетсябетаСубъединицы, и обеаСубъединицы одинаковы. использоватьhCGИммунизацияАнтисыворотка, полученная животными, содержитальфа-hCGСопротивлениебета-hCGДва типа антител, анти -альфа-hCGАнтитела будутЛХСредний
аФерменты вступают в перекрестную реакцию. В клинических испытаниях, например,hCGАнтисыворотка как диагностическое средство для беременностиhCGТолько для использованияhCGИспытания с более высокой концентрацией, иначеФизиологические выбросы в мочу женщинЛХС ним будет происходить перекрестная реакция. Таким образом, в качестве диагноза ранней беременности (чувствительность должна быть достигнута50mIu/mlhCGНа практике необходимоПрименение только дляhCGОсобенное сопротивление.бета-hCGЧтобы избежать перекрестных реакций с другими гормонами.

1.3.4Чувствительность

При определении содержания вещества в сыворотке чувствительность к химическому колориметрическому методу составляетмг/млУровень, чувствительность ферментативной реакции примерно5~10мкг/млМетод диффузии геля и метод мутности в иммунометрии имеют ту же чувствительность, что и метод ферментативной реакции. Отказ от маркировкиЧувствительность теста может быть повышена в тысячи раз.нг/млУровень. Например, радиоиммунометрия или ферментная иммунометрияHBsAgЕго чувствительность может0,1 нг / млА.

1.4Применение иммунологии в клинических испытаниях

Поскольку различные антигены, в том числе полуантигены мелких молекул, могут быть использованы для подготовки специфических антисывороток или моноклональных антител, использование этих антител в качестве реагентов позволяет обнаружить соответствующие антигены в образцахТаким образом, иммунометрия имеет чрезвычайно широкий спектр применений и может быть использована для определения в клинических испытаниях:

1)Различные белки в жидкостях организма, в том числе белки с очень низким содержанием, такие как протеин мезопротеин.

2)Гормоны, включая стероидные гормоны в небольших молекулярных массах и так далее.

3)Антибиотики и лекарства.

4)Антигены патогенов,HBsAgАHBeAgИ так далее.

5)Кроме того, можно использовать очищенные антигены для обнаружения антител в образцах, таких как антигены- HBsИ так далее.

5Маркировочные иммунометрии.

Как упоминалось выше, иммунометрия является очень чувствительным методом измерения, который непосредственно после реакции антигенных антител измеряет образование осаждения или мутности, чувствительность может быть достигнута5~10мкг/млОднако в клинических испытаниях содержание некоторых подлежащих измерению веществ в образцах значительно ниже этого уровня, поэтому необходимо искать способы повышения чувствительности. Иммунометрия маркера...Антигены или антитела в тестируемом реагенте маркируются микроизмеримым веществом, что повышает чувствительность путем измерения маркеров. В радиоиммунометрии и ферментативной иммунометрии маркерыДля радионуклидов и ферментов Zui затем использует измерения радиоактивности и ферментативной активности для расчета количества подлежащих проверке веществ, а чувствительность может быть в сотни - тысячи раз выше, чем при непосредственном измерении осадков. В маркерной иммунометрии,Чрезмерное количество маркированных реагентов обычно добавляется для обеспечения реакции с объектом *. Отметить антитело (Аб^※Тестирование антигенов (Аг(Для примера, формула реакции выглядит следующим образом:

Аг + Аб^※ Агаб^※+ Аб^※

В продуктах реакции есть иАгКомбинированныйАб^※& Свободная суммаАб^※ Если маркер измеряется без разделения двух, результат измерения будет равен сумме обоих. Таким образом, разделение свободных маркеров и ассоциированных маркеров является важным шагом в маркировочной иммунометрии. АС помощью различных средств твердофазный носитель является одним из них. Если антиген или пакет антител помещается на твердофазный носитель, а затем реагирует непосредственно с маркированным антигеном или антителом, связывающий маркер фиксируется в нагрузкеНа теле, а свободные маркеры остаются в растворе. Таким образом, они могут быть свободны при стирке.Аб^※Удаление, определение маркеров в сочетании может проводиться на твердой фазе.

6Иммунометрия ферментов

Иммунометрия (ферментиммуноанализМожно разделить на однородные (однородныйНеравномерность (гетерогенные) Два типа. В равных фазахОВОСЧжунканПрямое измерение маркеров не требует разделения свободных и ассоциированных маркеров. Например, при определенных условиях ферменты, образующиеся после реакции антигенных антител, отмечают потерю ферментов в антигенных антителочных комплексах.Его активность в действии на субстрат, и, следовательно, измеренная энзимная активность непосредственно отражает свободные маркеры ферментов. гомогенизацияОВОСМеньше используется в клинических испытаниях. неоднородностьОВОСДля начала необходимо свободное иСоедините маркеры для разделения. Как упоминалось ранее, твердофазный носитель может использоваться в качестве средства разделения. Этот метод иммунометрии твердофазных ферментов1971Когда был создан Zui, он назывался ферментным иммуносорбентом.Измерения (Энзимный иммуносорбентный анализ) СокращенияЭЛИСАВ стране есть интерпретируемые ферментативные иммуноадсорбционные испытания, хотя значение не * точно, но практикуется.