В области биологических наук, клинической диагностики и биофармацевтики крайне важно проводить точный и эффективный количественный и качественный анализ целевых молекул. Среди них ферментная иммуноадсорбция (ELISA) благодаря своей чувствительности, специфичности и высокой пропускной способности Droyue стала незаменимой золотой стандартной технологией в лаборатории. Появление комплекта ELISA стандартизирует и упрощает рабочие процессы этой сложной технологии, позволяя исследователям и клиническим тестам легко получать надежные результаты.

Основные принципы ELISA: специфическое сочетание антигенов и антител

Основной принцип ELISA заключается в использовании высокоспецифических иммунных реакций между антигенами и антителами и усилении сигнала и его обнаружении с помощью ферментативных маркеров. Проще говоря, как ключ может открыть только один замок, антитело обычно идентифицирует и связывает только один конкретный антиген.

В зависимости от целей и методов обнаружения ELISA имеет несколько основных типов:

1. Прямая элиза

Принцип: измеренный антиген адсорбируется непосредственно на твердофазном носителе (например, на 96 - пористой пластине), а затем присоединяется к специфическому сопротивлению маркера фермента. После стирки несвязанных антител добавьте ферментативный субстрат, чтобы генерировать сигнал.

Характеристика: Операционные шаги меньше, скорость, но сигнал может быть слабее, и каждый объект, подлежащий измерению, требует специфических ферментных маркеров антител.

2. Косвенная элиза

Принцип: антигенный пакет помещается на пластину, сначала добавляется немаркированный первый антиген в сочетании с антигеном, а затем добавляется маркированный ферментом второй антиген (антитела, идентифицирующие один антиген) для соединения. В конце добавить цвет субстрата.

Характеристика: Эффект усиления сигнала Xianzhu (один анти может сочетать несколько дианти), высокая чувствительность, высокая универсальность (один анти - ген из одного и того же источника может использовать один и тот же ферментный маркер для обнаружения второго анти - сопротивления), является одним из самых измененных методов.

3. Сосуд ELISA

Принцип: Это самый чувствительный и специфический метод обнаружения белковых антигенов. Сначала используется пакет « Захватывающие антителы», покрытый ферментным маркером, который используется для захвата целевого антигена в образце. Затем добавьте еще один « тест - антител», который связывается с другой поверхностью антигена, образуя структуру заполнителя « антитела - антиген - антител». Обнаружение антител может быть ферментным (прямой метод) или путем обнаружения с помощью ферментного антигена (косвенный метод).

Характеристики: Высокая чувствительность, сильная специфичность, подходит для обнаружения антигенов средней и низкой концентрации в сложных образцах (например, сыворотка, клеточная культура выше). Подавляющее большинство коммерческих наборов ELISA используют этот формат.

4. Конкуренция ELISA

Принцип: в основном используется для обнаружения мелких молекулярных антигенов (полуантигенов). Тестируемые антигены в образцах конкурируют с известным количеством ферментных антигенов в сочетании с антителами ограниченной liang. Чем выше концентрация подлежащих измерению антигенов в образце, тем меньше ферментных антигенов, связанных с антителами, и тем слабее сигнал, который в конечном итоге будет получен.

Характеристика: Сила сигнала обратно пропорциональна концентрации предмета, подлежащего измерению, и подходит для обнаружения мелких молекулярных веществ (таких как гормоны, лекарства).

Обнаружение сигнала: независимо от формы, в конце концов необходимо добавить ферментный субстрат. Часто используемыми ферментами являются пероксидаза хрена (HRP) и щелочная фосфатаза (AP). Субстраты реагируют под катализатором ферментов, создавая цветные продукты. Глубина цвета пропорциональна концентрации целевой молекулы в образце, и величина абсорбции может быть измерена с помощью ферментометра, чтобы нарисовать стандартную кривую и рассчитать точную концентрацию в пробах, подлежащих измерению.

Широкий спектр применения комплектов ELISA

Универсальность комплекта ELISA делает его ярким во многих областях:

Клиническая диагностика:

Тестирование на инфекционные заболевания: выявление вирусных антител (например, ВИЧ, гепатит В, гепатит С) или антигенов.

Мониторинг уровня гормонов: определение инсулина, гормонов щитовидной железы, половых гормонов и т.д.

Скрининг опухолевых маркеров: выявление AFP (протеин протеина протеина), CEA (антиген ракового эмбриона), PSA (специфический антиген предстательной железы) и так далее.

Аутоиммунная диагностика: выявление ревматоидных факторов, аутоантител и т.д.

Исследования в области наук о жизни:

Исследование цитокинов и сигнальных путей: количественный анализ уровней экспрессии цитокинов, таких как IL - 6, TNF - α, IFN - Гамма.

Исследования экспрессии и взаимодействия белков.

Разработка лекарственных средств и оценка их эффективности: выявление концентрации лекарственных средств в организме и их воздействия на биомаркеры.

Продовольственная безопасность и карантин животных:

Тестирование на аллергены: выявление аллергенов, таких как арахис и глютен в продуктах питания.

Тестирование на токсины: например, афлатоксин.

Анализ остатков ветеринарных препаратов.

Диагностика заболеваний животных и растений.

Стандартные этапы эксплуатации комплектов ELISA (например, метод эксцентрисирования)

Коммерческий набор ELISA предлагает все необходимые реактивы и оптимизированный протокол, который обычно включает в себя следующие ключевые шаги:

Подготовка к эксперименту:

Набор извлекают из холодильника и восстанавливают все реагенты до комнатной температуры (около 30 минут).

Готовьте образцы для тестирования, стандартные изделия и средства контроля качества.

Приготовьте необходимые моющие средства, проверьте рабочую жидкость антител и так далее.

Операционный процесс:

1. Пакеты закрываются с закрытыми: (Часть комплекта предварительно упакована, можно пропустить этот шаг)

Пакет: Добавьте захватывающее антитело в отверстие ферментативной маркировочной пластины, в подходящих условиях, чтобы антитела адсорбировались в стенке отверстия.

Мытье: отбросить жидкость, промыть пластину отверстия стиральной жидкостью несколько раз, удалить несвязанные антитела.

Закрытие: Добавьте закрытую жидкость (например, BSA, обезжиренное молоко), чтобы заполнить положение отверстия, которое не занято антителами, чтобы предотвратить неспецифическую адсорбцию в последующих шагах и уменьшить фон.

2. Добавление проб и теплообразование:

В отверстие добавляется ряд известных концентраций стандартных продуктов, подлежащих проверке образцов и средств контроля качества.

Герметичная диафрагма, при заданной температуре в течение определенного времени, так что целевой антиген захватывается антителом.

3. Мойка:

Выбросить жидкость из отверстия, заполнить отверстия моющим раствором, оставить через минуту после статической установки, повторить 3 - 5 раз. Этот шаг имеет решающее значение для полного удаления несвязанных веществ и является ключом к получению низкого фона и высокого отношения сигнала и шума.

4. Добавить тест - антитела:

Добавьте в каждое отверстие обнаруженные антитела, помеченные ферментами. Антитело связывается с другой поверхностью захваченного целевого антигена, образуя структуру заполнителя.

Вновь нагревайте, затем промывайте, чтобы удалить несвязанные тестовые антитела.

5. Добавление донных растворов:

В каждое отверстие добавляется свежий раствор ферментативной субстраты (например, TMB). В темноте избегая фототермального размножения, ферменты катализируют реакцию субстрата, создавая синий (для TMB) продукт.

6. Прекращение реакции и показания:

Добавьте окончательную жидкость (например, серную кислоту), реакция немедленно прекращается, цвет раствора меняется с синего на желтый.

В течение короткого периода времени после остановки реакции (обычно в течение 30 минут) для измерения абсорбции (OD) каждого отверстия на определенной длине волны (например, 450 нм в TMB) используется ферментометр.

7. Анализ данных:

Концентрация стандартного продукта является горизонтальной координатой, соответствующее значение OD - вертикальной координатой, рисует стандартную кривую.

Замена значения OD в тестируемом образце на стандартную кривую позволяет рассчитать точную концентрацию целевого антигена в образце.

Почему мы выбираем наш набор ELISA?

Высокая чувствительность и широкий динамический диапазон: может обнаруживать концентрации до уровня pg / mL и покрывать широкий линейный диапазон.

Специфика Droyue: тщательно проверенные высококачественные антитела, обеспечивающие очень низкие перекрестные реакции.

Превосходная повторяемость: небольшие различия между партиями и партиями гарантируют стабильные и надежные результаты эксперимента.

Операция проста и быстра: предоставляется предварительно упакованная обшивка, т.е. реактив типа и подробные инструкции, что значительно сокращает время эксперимента.

Полная линейка продуктов: охватывающая множество родов, несколько целей, чтобы удовлетворить ваши разнообразные исследовательские потребности.

Набор ELISA, как зрелый, эффективный и чувствительный инструмент биологического тестирования, стал краеугольным камнем количественной оценки и анализа белков в современных лабораториях. Будь то для передовых научных исследований или точной клинической диагностики, он может обеспечить надежную поддержку данных. Выбор высококачественного комплекта ELISA является первым шагом к успеху вашего эксперимента.

Добро пожаловать в нашу компанию, чтобы найти набор ELISA, подходящий для ваших исследовательских целей. Если у вас возникнут какие - либо технические проблемы, пожалуйста, свяжитесь с нашей командой технической поддержки.