Качество образцов клеток напрямую связано с надежностью и повторяемостью результатов эксперимента. Shanghai Cobery Biological предоставит вам основные моменты подготовки и сохранения образцов клеток, предоставит исследователям стандартизированные оперативные ссылки, чтобы гарантировать, что образцы клеток сохраняются в самом jia состоянии, сохраняя свои биологические свойства и экспериментальную ценность.
Ключевые этапы подготовки образцов клеток
1. Подготовка до подготовки
- Экспериментальное проектирование четко: определение вариантов подготовки в соответствии с последующими экспериментальными целями (например, протеомика, транскриптомика, клеточная культура и т.д.)
- Готовность реагентов и расходных материалов: все реагенты и расходные материалы, вступающие в контакт с клетками, должны быть стерильными, безнуклеотидными ферментами / протеазами
- Предварительное охлаждение оборудования: роторы центрифуг, криогенные трубы и т.п.
2. Сбор и обработка клеток
- Подтверждение клеточного состояния: убедитесь, что клетка находится в логарифмическом периоде роста, скорость живых клеток > 95%
- Умеренная обработка: избегайте сильных ударов, промывайте предварительно охлажденным PBS или физиологическим раствором
- Своевременная обработка: обработка как можно скорее после извлечения из инкубатора, чтобы уменьшить клеточный стресс
3. Требования в отношении особого режима
- Образец для анализа белка: добавьте смесь ингибиторов протеазы, чтобы избежать повторной заморозки и таяния
- Анализ образцов нуклеиновых кислот: использование расходных материалов без РНК / DNase с добавлением РНК - защитных средств
- Метаболические образцы: быстрая закалка метаболической активности с использованием предварительно охлажденного метанола или специального закалочного раствора
Методы сохранения клеток и их выбор
1. Краткосрочное хранение (< 24 часа)
- Сохранение при 4°C: суспензия в полной кванской питательной среде или буферной жидкости
- Применимость: проведенные в тот же день эксперименты по проточной цитологии, визуализации живых клеток и т.д.
- Меры предосторожности: Избежание бактериального загрязнения, герметичное хранение
2. Среднесрочное хранение (1 неделя - 1 месяц)
- Сохранение при температуре 80°C: Добавление защитного агента, пригодного для замораживания
- Рекомендуется замороженная жидкость:
- Клеточная культура: сыворотка коровьего плода, содержащая 10% DMSO
- Анализ белков: крекинг, содержащий ингибиторы протеазы
- Анализ нуклеиновых кислот: реагенты для защиты РНК (например, TRIzol или специализированные консерваторы)
Долгосрочное хранение (> 1 месяц)
- Сохранение жидкого азота (- 196°C): самый jia метод поддержания активности клеток
- Программа замораживания:
«...»
1. Процедурное охлаждение: 4°С 30 мин → 20°С 2 ч → 80°С Ночь
2. Переход в газовую фазу жидкого азота (- 150°С) для долгосрочного хранения
«...»
- Выбор рефрижераторной трубки: пометка клеточной информации, дата замораживания, частота передачи, оператор
III. Элементы контроля качества
1.Тестирование активности клеток
- До и после замораживания проводится проверка на голубое окрашивание или МТТ.
- Активность клеток после восстановления должна быть > 80% (в идеале > 90%)
2. Контроль за загрязнением
- Регулярное выявление загрязнения микроорганизмами
- Бактериальное и грибковое загрязнение. Наблюдение за невооруженным глазом и зеркальное обследование
- Клеточное перекрестное загрязнение.
3. Маркировка и регистрация
- Системы управления QR - кодами или штрих - кодами
- Детально записывать происхождение клетки, процесс обработки, место хранения
IV. Решения часто возникающих проблем
Вопрос, возможная причина, решение.
Низкая клеточная активность после восстановления
Деградация белка Недостаточный ингибитор протеазы Добавить несколько ингибиторов протеазы смесь
Деградация РНК. Загрязнение РНК во время операции. Использование расходных материалов без РНК, быстрая обработка.
Загрязнение микоплазмом / Загрязнение протоклетками или операциями
V. Меры предосторожности
Биобезопасность: соблюдение требований соответствующего уровня биобезопасности в зависимости от источника клеток
2. Операции с жидким азотом: ношение защитных масок и перчаток для предотвращения обморожения
Химическая безопасность: надлежащая обработка реагентами, такими как DMSO, чтобы избежать прямого контакта с кожей
4. Обработка отходов: клеточные отходы обрабатываются в соответствии с процессом обращения с биологически опасными материалами
VI. Резюме рекомендуемых вариантов сохранения
Рекомендуемый метод хранения, температура хранения, ожидаемое время хранения.
Реанимационные культуры клеток DMSO + сыворотка замерзает жидкий азот более 10 лет.
Western Blot / RIPA - раствор для крекинга ~ - 80°C ~ 1 год
РНК - экстракция / TRIzol или РНК - защитный агент
Метаболизм 80% метанол закалка
Поточная клеточная хирургия PBS, содержащая 2% FBS
VII. Интеллектуальная система управления
Лаборатории рекомендуется создать электронную систему управления образцами клеток, которая включает:
- Отслеживание местоположения образца в реальном времени.
- Автоматическое обновление записей замораживания / извлечения
- Регулярные инвентаризационные проверки и напоминания
- Быстрый поиск информации о выборке

Высококачественные образцы клеток являются краеугольным камнем успеха эксперимента. Благодаря стандартизированным процессам подготовки и научным методам сохранения биологическая целостность образцов клеток может быть сохранена в максимально возможной степени. С развитием новых технологий, таких как одноклеточный анализ и пространственная транскриптомия, требования к качеству образцов клеток будут еще более улучшены. Установление строгих норм управления образцами - это не только необходимость обеспечения надежности текущих экспериментов, но и стратегические инвестиции в сохранение ценных биологических ресурсов для будущих исследований.