Как выбрать экспериментальные условия для набора ELISA для клеток человека?

вЧеловеческие клетки ELISAСреди них важно выбрать различные экспериментальные условия, в том числе:

　　

1. Выбор твердого носителя: многие вещества могут использоваться в качестве твердых носителей, таких как поливинилхлорид, полистирол, полиакриламид, целлюлоза и так далее. Форма может быть вогнутой пластиной, пробиркой, бисером и так далее. В настоящее время обычно используется 40 - отверстие из полистирола. Независимо от того, какой носитель, перед использованием может быть проведен скрининг: пакет реагирует эквивалентным количеством антигенов, в тех же экспериментальных условиях, наблюдая, является ли реакция цвета равномерной, чтобы определить, являются ли ее адсорбционные свойства хорошими.

　　

2. Выбор упаковки с антителами (или антигенами): когда антитела (или антигены) адсорбируются на поверхности твердого носителя, требуется хорошая чистота, обычно требуется pH от 9,0 до 9,6. Температура адсорбции, время и количество белка также оказывают определенное влияние. Обычно при 4°C используется 18 - 24 часа. Требуется титрование соответствующей концентрации белкового пакета: т.е. различных концентраций белка (0,1, 1,0 и 10 мкг / мл и т.д. Выберите концентрацию с большим OD - значением zui и малым количеством белка zui. Для большинства белков, как правило, 1 - 10 мкг / мл.

　　

Выбор рабочей концентрации ферментативного антитела: сначала титрование начальной ценности методом ELISA в наборе ELISA для клеток прямого человека (см. раздел антитела ферментативного маркера). Затем фиксация других условий или точное титрование рабочей концентрации в формальной экспериментальной системе с использованием метода квадратной решетки (покрытие, эталонные образцы проб, подлежащих тестированию, и антитела ферментативного маркера с разной степенью разбавления).

　　

Выбор ферментативного субстрата и донора водорода: выбор донора водорода требует дешевой, безопасной, яркой и бесцветной реакции. Некоторые доноры водорода (например, OPD) обладают потенциальным канцерогенным эффектом и должны быть защищены. Если позволяют условия, следует использовать нераковые и высокочувствительные питатели водорода, такие как ТМБ и АБТС, которые в настоящее время являются более удовлетворительными питателями водорода. После некоторого времени действия субстрата следует добавить сильные кислоты или сильные щелочи, чтобы остановить реакцию. Общее время действия субстрата должно составлять 10 - 30 минут. Раствор субстрата должен быть свежеприготовлен, особенно с добавлением H2O2 перед использованием.