Основные реактивы и приборы: инвертированный дифференциальный микроскоп (японский olympus imt - 413), инкубатор co2 (японский yamato it - 61).

Реабилитационная культурная передача и замораживание клеток hek - 293

3Реанимационная культура клеток вынимает из резервуара жидкого азота трубку для замораживания и немедленно вводит ее в водную ванну при температуре 37°C и постоянно качается, чтобы она быстро растаяла. Вытащите растворенную клеточную замороженную трубку, откройте ее после дезинфекции спиртом, высасывайте растворимую клеточную замороженную жидкость, добавьте предварительно загруженную питательную жидкость (подогрев 37°C, объем 8 - 10 раз) в центробежную трубку, слегка выдувайте и перемешайте, затем 1000 rpm 5 мин, удалите верхнюю очистку, добавьте соответствующее количество питательной жидкости, вдувайте в клеточную суспензию, с плотностью 1×105 / мл, введите в культурную бутылку 25cm2, культивируйте при температуре 37°C, 5% co2 и насыщенной влажности.

4. Клеточная транскрипция ПротогенныйHek - 293 клетки 48h обмен жидкости 1 раз, длина клетки до 60% - 70% слияния, с 0,25% переваривания 1 - 2 мин, питательная бутылка, а затем ладонь мягко ударить, чтобы удалить клетку от стенки, суспензии, дисперсии, для дальнейшего рассеивания клетки может быть шланг мягко дуть несколько раз, чтобы получить клеточную суспензию, а затем добавить удвоенное количество питательной среды, мягкое смешивание, соломинка распределяет смесь, передавая расширенные клетки.

5. Наблюдение за морфологией клеток Наблюдение и регистрация роста и морфологических характеристик клеток под перевернутым микроскопом.

6. Количество клеток Обычные пищеварительные клетки, пока клетки округляются, снимают стенки и плавают, добавляют небольшое количество питательных сред центрифуги, а затем используютПБС взвесили и взорвали, чтобы сделать клеточную суспензию. На одной стороне стекла клеточной счетной пластины добавляется микроклеточная суспензия, и количество клеток в четырехугольной ячейке счетной пластины измеряется с помощью объектива 10×, рассчитанного по формуле. Клеточное число / мл протожидкости = (сумма / 4) × 104.

7. Стенная плотность клеток Клетки, которые растут экспоненциально,0.25% переваривается в одноклеточную суспензию, после подсчета вакцинируется в 12 бутылках с культурой 25cm2, каждые два часа случайным образом удаляется 3 бутылки клеток, всасывается питательная среда и не прикрепленные к стенке клетки, добавляется пищеварение пищеварительного фермента поджелудочной железы, подсчет прикрепленных к стенке клеток, чтобы получить их среднее значение, в соответствии с формулой: скорость стенки (%) =

8. кривая роста Взять экспоненциально растущие клетки из пищеварения в одноклеточную суспензию, чтобы1 × 104 / отверстие вводится в 24 - отверстия пластины с добавлением 1 мл питательной среды на отверстие. Делайте случайные 3 отверстия в день, подсчитывайте количество клеток в каждом отверстии и вычисляйте среднее значение. Непрерывный подсчет 10d и построение кривой роста клеток