Полнопузырьковый протеаза 1 (CASP1) Человеческий реактив

Все виды Цитопротеаза 1 (CASP1) Человеческий реактив
Введение
Преобразовательная фермента Caspase - 1 / 1 - интерлейкин - 1 (ICE) является эволюционно консервативным ферментом, который разлагает другие белки, такие как предшественники воспалительного цитокина интерлейкина 1β и интерлейкина 18, а также индуктор лихорадки Гасдермин D, на активные зрелые пептиды. Как только он активируется путем образования воспалительного комплекса, он запускает два воспалительных цитокина через крекинг - интерлейкин 1β (IL - 1β) и интерлейкин 18 (IL - 18), а также два воспалительных цитокина, активированных Caspase - 1 путем крекинга Gasdermin D (процедурный путь клеточной смерти), которые выводятся из клетки, вызывая дальнейшие воспалительные реакции соседних клеток. Заболевания, связанные с CASP1, включают оспу и болезнь Шига. Иммунометрия человека CASP1 представляет собой трехступенчатый твердофазный заполнитель ELISA, используемый для измерения людей CASP1 в клеточной питательной жидкости, сыворотке крови и плазме крови. Набор включает в себя кишечную палочку, экспрессирующую рекомбинантный CASP1 человека, и антитела, вырабатываемые против рекомбинантных белков. Результаты, полученные с помощью CASP1, показывают линейные кривые, параллельные стандартным кривым, полученным с помощью рекомбинантного стандартного продукта. Эти результаты показывают, что набор может быть использован для определения относительной массы CASP1 для природного человека.

Принцип обнаружения

В комплекте используются двойные антитела.Технология ELISA: Захватывающий антитело пакет помещается на энзимную пластину, образец захвата и стандартный продукт, подлежащий измерению CASP1, после инкубационной очистки, затем добавляется маркированное тестовое антитело для последующей инкубационной очистки, образуется иммунный комплекс « Захватывающее антитело - антиген - обнаруженное антитело », затем добавляется стрептоплесень и связанный с белком пероксидаза хрена для инкубации, после инкубации очищается, затем добавляется цветовидный раствор TMB, если образец должен быть измерен синим, добавляется прекращение реакции. Все ингредиенты, которые были свободны во время тестирования, были смыты, и значение OD было измерено с помощью ферментометра на 450 нм, глубина цвета была пропорциональна содержанию подлежащего измерению вещества в образце, а концентрация CASP1 в образце была рассчитана путем построения стандартной кривой.

Оперативные элементы

1. При смешивании белковых растворов всегда следует избегать пузырьков. Во избежание перекрестного загрязнения при добавлении каждого стандартного изделия, образца и реагента следует заменить головку детонатора. Кроме того, каждый реактив должен использоваться отдельно в контейнере.

Обеспечить непрерывное добавление реагента в отверстие пластины. Чтобы обеспечить точный результат, на стадии инкубации необходимо склеить хорошую мембрану.

При использовании автоматической стиральной машины точность измерений может быть повышена путем добавления 30 - секундного периода погружения после добавления моющего буфера или вращения пластины на 180 градусов между этапами стирки.

4. Цветовой проявитель должен оставаться бесцветным до тех пор, пока его не добавят в пластину. Обеспечить, чтобы проявитель не подвергался воздействию света. Цветовой состав должен быть бесцветным и синим.

Конечный раствор следует добавлять в пластину в том же порядке, что и цветопроявитель. После добавления концевой жидкости цвет, образующийся в отверстии, изменится с синего на желтый. Зеленые отверстия указывают на то, что концевая жидкость не полностью смешивается с основным раствором.

Другие необходимые материалы

1. Ферментный маркер, содержащий 450 нм измеренной длины волны и более совершенную коррекционную длину волны 600 - 680 нм;

2. Мигратор и головка пистолета;

3. Дистиллированная или деионизированная вода;

4. шкала 100 - 1000 мл;

5. стиральная машина для бутылок, ружей или автоматических микропористых пластин;

6. Генераторы с микропористой пластиной на горизонтальной орбите, способные поддерживать скорость 500 ± 50 rpm;

7. пробирки для разбавления стандартных продуктов и образцов.

Все виды Цитопротеаза1 (CASP1) Человеческий реактив
Меры предосторожности

1. Конечный раствор, предоставляемый в настоящем наборе реактивов, представляет собой раствор разреженной серной кислоты, обладающий определенной коррозионной способностью и должен эксплуатироваться с осторожностью.

Некоторые компоненты в этом наборе содержат консерванты, которые могут вызвать аллергические реакции на коже, и маску следует носить, чтобы избежать вдыхания тумана.

Отличитель цвета B может вызывать раздражение кожи, глаз и дыхательных путей, и маску следует носить, чтобы избежать вдыхания тумана.

4. Носить защитные перчатки, средства защиты глаз и лица, мыть руки после обработки.

Приготовьтесь.

Перед использованием все реагенты помещаются в равновесие комнатной температуры примерно на 30 минут.

2. Конфигурация скруббера / разбавленного раствора: если скрубберка / разбавленный раствор (20×) имеет кристаллическое выделение, кристалл нагревается при 37°C и полностью растворяется. Разбавить дистиллированной водой 1: 20 (например: 1 мл концентрированного скруббера с добавлением 19 мл дистиллированной воды)

Стандартная конфигурация

Извлечь стандартный товар из комплекта, приготовитьСемь пробирок, сперва10 мкг/млСтандартные (200 мкл) по мере необходимости разбавляется до 500 нг / мл с помощью разбавленного раствора 1× (пример: стандартная материнская жидкость + 950 мкл, полученная стандартная концентрация 500 нг / мл 1000 мкл), затем добавляется в шесть пробирок с разбавленным раствором 1× 500 мкл, в которых стандартный продукт 500нг / мл разбавляется в два раза по сравнению с 6 градиентами, и в общей сложности производится семь стандартных концентраций, в свою очередь:500% / мл, 250% / мл, 125% / мл, 62,5 нг / мл, 31,25 нг / мл, 15,625 нг / мл,Из стандартного раствора концентрата.500 мкл стандартного продукта в следующую пробирку, мягко выдувается и смешивается, и так далее, чтобы сделать удвоение стандартного продукта (как показано на рисунке), разбавленный раствор 1× используется в качестве стандартного продукта с нулевой концентрацией (0 нг / мл)

Расчет результатов

Расчет средней пористости стандартных изделий и образцовЗначение OD вычитается из значения OD пустого отверстия в качестве коррекционного значения. Концентрация как горизонтальные координаты, значение OD как вертикальные координаты, стандартная кривая для четырехпараметрической логической функции, нарисованная на бумаге координат (значение пустой группы при построении диаграммы), или стандартная кривая, созданная с помощью компьютерного программного обеспечения, способного генерировать четыре параметрических логических (4 - P) кривых. Если значения OD в образце превышают верхний предел стандартной кривой, они должны быть соответствующим образом измерены после разбавления и умножены на соответствующее кратное разбавления при расчете концентрации образца.А.

Примерные данные

Приведенные ниже данные и кривые предназначены только для справки, и экспериментаторы должны установить стандартные кривые на основе своих собственных экспериментальных данных.

Стандартная кривая, показанная на этом рисунке, используется только в качестве примера, и расчет результатов должен основываться на стандартной кривой, нарисованной на том же испытательном стандарте
чувствительность

После тестирования образцов чувствительность к обнаружению этого комплекта составляет3,91 нг/мл.

Специфичность

Набор реагентов идентифицирует естественных и рекомбинантных людей.КАСП1А.

Другие родственные белки готовятся в разбавленном буфере50ng/mL， И измерить перекрестную реактивность. Заметных перекрестных реакций не наблюдалось.

Резюме этапов эксперимента
1.Добавить стандартные изделия и образцы, 37°C светозащитная реакция 1.5h, промывание 3 раза.

2. Плюс тест на антитела,37°C Светоизоляция 1h, промывание 4 раза.

3. Ферментные соединения,Светоизоляция при температуре 37°C в течение 30 минут, стирка 4 раз.

4. Добавление проявительной жидкости, светозащитная реакция 37°C в течение 15 минут.

5. Добавьте жидкость для прекращения, чтобы дать показания в течение 5 минут

человекЦитопротеаза1 (КАСП1)Набор реагентов используется для количественного обнаружения клеток, культивирующих верхнюю очистку, сыворотку крови, людей в плазме крови.КАСП1Перед использованием данного продукта необходимо полностью прочитать инструкцию.ЧеловекНабор ELISA предназначен только для научных исследований и не предназначен для других диагностических целей.А.