ml 105965 Коллаген IV тип α1 (COL4 α1) Человеческий реактив

ml 105965 Коллаген IV тип α1 (COL4 α1) Человеческий реактив
Введение
Коллаген IV типа α1 (COL4A1) - белок, кодированный геном COL4A1 на 13 - й хромосоме. Он принадлежит к семейству коллагенов типа IV и состоит из трех структурных доменов: короткого n - полюсного домена, длинного трехспирального 7S домена, расположенного в его центре, и некоагенового домена 1 (NC1), расположенного на его C - конце. Он широко выражен во многих типах тканей и клеток. COL4A1 является субъединицей коллагена типа IV, который играет роль в ангиогенезе. Мутации гена связаны с заболеваниями мозга, мышц, почек, глаз и сердечно - сосудистой системы. Иммунометрия COL4 α1 для человека в этом наборе представляет собой трехэтапный твердофазный заполнитель ELISA, используемый для измерения COL4 α1 у людей в цитоплазме, сыворотке крови и плазме крови. Набор включает в себя кишечную палочку, экспрессирующую рекомбинантный человеческий COL4 α1 и антитела, вырабатываемые против рекомбинантных белков. Результаты, полученные с использованием натурального COL4 α1, показывают линейные кривые, параллельные стандартным кривым, полученным с использованием рекомбинантного стандартного продукта. Эти результаты показывают, что этот набор может быть использован для определения относительной массы COL4 α1 у естественных людей.

Принцип обнаружения

В комплекте используются двойные антитела.Технология ELISA: Захватывающий антитело пакет помещается на ферментную пластину, образец захвата и стандартный продукт, подлежащий измерению COL4α1, после инкубационной очистки, затем добавляется маркированное тестовое антитело для очистки после инкубации, образуется иммунный комплекс « Захватывающее антитело - антиген - детектирующее антитело », затем добавляется пероксидаза хрена, ассоциированная со стрептомицином, для размножения, после инкубации очищается, затем добавляется TMB - проявитель, если в образце будет обнаружен синий цвет, добавляется прекращающая реакция. Все ингредиенты, которые были свободны в ходе испытаний, были смыты, и значение OD было измерено с помощью ферментометра на 450 нм, глубина цвета была пропорциональна содержанию подлежащего измерению вещества в образце. Концентрация COL4 α1 в образце была рассчитана путем построения стандартной кривой.

Оперативные элементы

1. При смешивании белковых растворов всегда следует избегать пузырьков. Во избежание перекрестного загрязнения при добавлении каждого стандартного изделия, образца и реагента следует заменить головку детонатора. Кроме того, каждый реактив должен использоваться отдельно в контейнере.

Обеспечить непрерывное добавление реагента в отверстие пластины. Чтобы обеспечить точный результат, на стадии инкубации необходимо склеить хорошую мембрану.

При использовании автоматической стиральной машины точность измерений может быть повышена путем добавления 30 - секундного периода погружения после добавления моющего буфера или вращения пластины на 180 градусов между этапами стирки.

4. Цветовой проявитель должен оставаться бесцветным до тех пор, пока его не добавят в пластину. Обеспечить, чтобы проявитель не подвергался воздействию света. Цветовой состав должен быть бесцветным и синим.

Конечный раствор следует добавлять в пластину в том же порядке, что и цветопроявитель. После добавления концевой жидкости цвет, образующийся в отверстии, изменится с синего на желтый. Зеленые отверстия указывают на то, что концевая жидкость не полностью смешивается с основным раствором.

Другие необходимые материалы

1. Ферментный маркер, содержащий 450 нм измеренной длины волны и более совершенную коррекционную длину волны 600 - 680 нм;

2. Мигратор и головка пистолета;

3. Дистиллированная или деионизированная вода;

4. шкала 100 - 1000 мл;

5. стиральная машина для бутылок, ружей или автоматических микропористых пластин;

6. Генераторы с микропористой пластиной на горизонтальной орбите, способные поддерживать скорость 500 ± 50 rpm;

7. пробирки для разбавления стандартных продуктов и образцов.

ml 105965 Коллаген IV тип α1 (COL4 α1) Человеческий реактив
Меры предосторожности

1. Конечный раствор, предоставляемый в настоящем наборе реактивов, представляет собой раствор разреженной серной кислоты, обладающий определенной коррозионной способностью и должен эксплуатироваться с осторожностью.

Некоторые компоненты в этом наборе содержат консерванты, которые могут вызвать аллергические реакции на коже, и маску следует носить, чтобы избежать вдыхания тумана.

Отличитель цвета B может вызывать раздражение кожи, глаз и дыхательных путей, и маску следует носить, чтобы избежать вдыхания тумана.

4. Носить защитные перчатки, средства защиты глаз и лица, мыть руки после обработки.

Приготовьтесь.

Перед использованием все реагенты помещаются в равновесие комнатной температуры примерно на 30 минут.

2. Конфигурация скруббера / разбавленного раствора: если скрубберка / разбавленный раствор (20×) имеет кристаллическое выделение, кристалл нагревается при 37°C и полностью растворяется. Разбавить дистиллированной водой 1: 20 (например: 1 мл концентрированного скруббера с добавлением 19 мл дистиллированной воды)

Стандартная конфигурация

Извлечь стандартный товар из комплекта, приготовитьСемь пробирок, сперва1 мкг/млСтандартные (200 мкл) по мере необходимости разбавляется до 50 нг / мл с помощью разбавленного раствора 1× (пример: стандартная материнская жидкость + 950 мкл разбавленного раствора 1×, полученная стандартная концентрация 50нг / мл 1000 мкл), затем добавляется в шесть пробирок с разбавленным раствором 1× 500 мкл, в этих шести отдельных пробирках стандартный продукт 50нг / мл разбавляется в два раза по сравнению с 6 градиентами, в общей сложности семь стандартных концентраций:50% / мл, 25% / мл, 12,5% / мл, 6,25 нг / мл, 3.125 нг / мл, 1.563 нг / мл,Из стандартного раствора концентрата.500 мкл стандартного продукта в следующую пробирку, мягко выдувается и смешивается, и так далее, чтобы сделать удвоение стандартного продукта (как показано на рисунке), разбавленный раствор 1× используется в качестве стандартного продукта с нулевой концентрацией (0 нг / мл)

Расчет результатов

Расчет средней пористости стандартных изделий и образцовЗначение OD вычитается из значения OD пустого отверстия в качестве коррекционного значения. Концентрация как горизонтальные координаты, значение OD как вертикальные координаты, стандартная кривая для четырехпараметрической логической функции, нарисованная на бумаге координат (значение пустой группы при построении диаграммы), или стандартная кривая, созданная с помощью компьютерного программного обеспечения, способного генерировать четыре параметрических логических (4 - P) кривых. Если значения OD в образце превышают верхний предел стандартной кривой, они должны быть соответствующим образом измерены после разбавления и умножены на соответствующее кратное разбавления при расчете концентрации образца.А.

Примерные данные

Приведенные ниже данные и кривые предназначены только для справки, и экспериментаторы должны установить стандартные кривые на основе своих собственных экспериментальных данных.

Стандартная кривая, показанная на этом рисунке, используется только в качестве примера, и расчет результатов должен основываться на стандартной кривой, нарисованной на том же испытательном стандарте
чувствительность

После тестирования образцов чувствительность к обнаружению этого комплекта составляет0,39 нг/мл.

Специфичность

Набор реагентов идентифицирует естественных и рекомбинантных людей.COL4α1А.

Другие родственные белки готовятся в разбавленном буфере50ng/mL， И измерить перекрестную реактивность. Заметных перекрестных реакций не наблюдалось.

Резюме этапов эксперимента
1.Добавить стандартные изделия и образцы, 37°C светозащитная реакция 1.5h, промывание 3 раза.

2. Плюс тест на антитела,37°C Светоизоляция 1h, промывание 4 раза.

3. Ферментные соединения,Светоизоляция при температуре 37°C в течение 30 минут, стирка 4 раз.

4. Добавление проявительной жидкости, светозащитная реакция 37°C в течение 15 минут.

5. Добавьте жидкость для прекращения, чтобы дать показания в течение 5 минут

человекКоллагенТип IV α1 (COL4 α1)Набор реагентов используется для количественного обнаружения клеток, культивирующих верхнюю очистку, сыворотку крови, людей в плазме крови.COL4α1Перед использованием данного продукта необходимо полностью прочитать инструкцию.ЧеловекНабор ELISA предназначен только для научных исследований и не предназначен для других диагностических целей.А.