Набор для тестирования MTT

Параметры продукта:

МТТ широко используется для обнаружения роста клеток на том основании, что МТТ может быть восстановлен дегидрогеназой в митохондриях живых клеток для получения темно - фиолетовых кристаллов формазана, в то время как мертвые клетки не имеют такой активности. После растворения темно - фиолетовые кристаллы formazan могут измерять их концентрацию путем измерения поглощения света на длине волны 490 нм, что позволяет предположить жизнеспособность клеток, и чем больше они размножаются, тем выше их поглощение; Чем больше клеточная токсичность, тем ниже абсорбция.

Подробное описание товаров:

Экспериментальный отчет:

I. Разделение и культивирование:

В стерильных условиях удалите ткань предсердия у крыс SD 1 - 3D - возраста, затем очистите этот блок ткани 2 раза с помощью PBS и, наконец, разрежьте ткань примерно на 1 мм3;

2. Добавьте 4 мл ферментативного пищеварительного раствора (0,1% и 0,1% коллагеназы типа I) в тканевый блок, перемешайте 10s, переваривайте 10 мин при 37°C, затем выдувайте капельницу в одноклеточную суспензию, естественным образом осаждайте и собирайте очищение, с 10% питательной среды FBS, чтобы прекратить переваривание после 4 °C;

3. Оставшаяся ткань добавляется 3 - 4 мл ферментативного пищеварительного раствора, смешивается 10s, после переваривания 37°C 10 мин, в соответствии с вышеуказанным методом сбора очищения и прекращения пищеварения после размещения 4°C, повторяйте этот шаг 2 - 3 раза, пока ткань * не переваривается;

4. фильтровать клеточный пищеварительный раствор с помощью сита из нержавеющей стали 200 подкласса, 1200 р / мин центрифуги 10 мин, отбросить верхнюю очистку, осадочные клетки с 10% FBS DMEM / F12 питательной среды, смешанной подвеской, вакцинированной в 25cm2 питательной бутылке, помещенной в 37 ° C, 5% CO2 культивируемой коробки;

5. После дифференциального наклеивания стенки на 1h высасывается питательная среда, которая вводится в соответствии с экспериментальными потребностями в 6 - луночной пластине для продолжения культивирования;

ii. иммунофлуоресцентная идентификация:

Когда клетки предсердной мышцы вырастают до 80% слияния, выбрасывайте питательную среду, промывайте клетки теплой PBS 2 раза по 10 мин каждый, а затем закрепляйте клетки 15 мин 4% полиформальдегидом при комнатной температуре;

2. PBS промывает клетки 2 раза по 10 мин каждый, а затем при 4°C с 0,1% проницаемой пленки Triton X - 100 15 мин;

PBS промывает клетки 2 раза по 10 мин каждый, а затем закрывает клетки на 30 мин 4% BSA при комнатной температуре;

Разбавить альфа - актин - антиген в масштабе 1: 100 и поместить его на ночь в инкубационные клетки в холодильнике при температуре 4°C;

5. PBS промывает клетки 3 раза, по 10 мин каждый, разбавляет анти - альфа - actin дианти в масштабе 1: 150, помещает 1 ч при 37°C;

Промыть 3 раза с помощью PBS по 10 минут каждый и, наконец, посмотреть изображение и сфотографировать его под перевернутым флуоресцентным микроскопом.

Шаги обучения:

1. Извлечь капсулу из 75% этанола пинцетом с крышкой, протереть стерильной шелковой тканью, а не марлей;

2. Упаковка стеклянной плиты аккуратно помещается в 6 - луночную культурную плиту (по одной на отверстие) или в чашку Петри (по 2 - 3 на чашку);

3. облучение в течение 2 - 3 часов на расстоянии 20 - 30 см от прямого ультрафиолетового освещения;

4. Переместить подсчитанную клеточную суспензию в питательную пластину, чтобы покрытое стекло * было погружено в питательную жидкость;

5. Культурная пластина инкубация при температуре 37°C в инкубаторе водяной ванны 5% CO2 в течение 2 - 3 дней, когда клетки стенки растут до площади 2 / 3 на дне пластины, удалите культурную пластину, аккуратно удалите крышку с помощью пинцета крышки, после дрейфа дистиллированной водой можно быстро зафиксировать и химически проверить иммунные клетки.

Эксперименты и описание:

1. Настоящий метод применим к культивированию клеток, прикрепленных к стенке, а не к культуре взвешенных клеток, которые могут использовать метод капли;

2. Использованное стекло крышки должно быть высококачественным и обработано раствором хромовой кислоты;

3. Стекло крышки очень тонкое, хрупкое, действие должно быть легким при снятии стекла крышки;

Если требуется больше клеток с идентичным состоянием роста, можно использовать большую чашку Петри, но не слишком большую, чтобы избежать отходов питательной жидкости и увеличить вероятность загрязнения;

Если клетки плохо растут на стенках, капсулы можно замачивать в течение 5 - 10 минут в более чем 0,5% растворе полилизина и высушивать естественным образом.

Оперативные элементы:

1) подогревать питательную среду в водяной ванне при температуре 37°C; Приготовьте стерильную центробежную трубку 15 мл и добавьте 8 мл подогреваемой среды.

2) Вытащите замороженные клетки из резервуара с жидким азотом и быстро поместите их в водяную ванну с температурой 37°C для восстановления температуры (можно подготовить чистую чашку, заполненную водой с температурой 37°C, после удаления трубки для замораживания клеток быстро поместите в чашку, а затем постепенно переместите в водяную ванну). Аккуратно встряхните замороженную трубку, так что клетка может оттаять в пределах 1 - 2 мин *, так что клетка может как можно скорее пройти через наиболее уязвимый температурный диапазон (- 5 - 0°C). Обратите внимание, что отверстие трубки замораживания не может не попасть в воду, BRL (клетки печени крысы) избегает загрязнения.

3) Протрите замороженную трубку 75% спиртом, а затем поместите в сверхчистый стол, внутреннюю клетку трубки переместите в готовую центробежную трубку, мягко вдувайте жидкость, так что клетки равномерно рассеиваются, снижая концентрацию DMSO, чтобы избежать образования пузырьков при дутье. Стены труб промывают свежими питательными средами 2 раза, все они переносятся в центробежные трубы.

4) 800rpm центрифуга 5min, отбросить, добавить свежие питательные среды, вдувать в клеточную суспензию.

5) Перенесите клеточную суспензию в клеточную бутылку T25, добавьте соответствующее количество питательной среды, мягко встряхните клеточную бутылку, чтобы клетки были распределены равномерно и помещены в термос для культивирования.

6) Наблюдайте за ростом клеток, прикрепленных к стенкам, на следующий день и заменяйте свежие питательные среды для удаления мертвых клеток. Продолжайте культивировать, ожидая, что клетки вырастут до 80 - 90% слияния, когда нормальная передача. Клетки, которые, как правило, только что восстановились, должны пройти 2 - 3 передачи, прежде чем они смогут провести последующие эксперименты после восстановления клеточной активности.

Ингибиторы ангиотензина - 1

Антагонистический фактор транскрипции

Альфа - 1 против поджелудочной железы

ATP - связывающие белки семейства 6 антитела

Антитела семейства G1

Липидный рецептор 2 антитела

Антитела ANGEL1

Антитела ANGEL2

Антитела ANKLE2

Яблочный якорный белок 1

Якорный белок Повторяющийся структурный домен 13B антитела

Якорный белок Повторяющийся доменный белок 20A1 антитела

Якорный белок Повторяющийся структурный домен 20A3 антитела

Якорный белок Повторяющийся доменный белок 22 Антитела

Якорный белок Повторяющийся структурный домен 50 Антитела

БК - 020 (клетки рака молочной железы человека) 5×106cells / бутылка ×2

БК - 021 (клетки рака молочной железы человека) 5×106cells / бутылка ×2

БК - 022 (клетки рака молочной железы человека) 5×106cells / бутылка ×2

BE (2) - M17 (клетки нейробластомы человека) 5×106cells / бутылка ×2

BGC - 803 (клетки рака желудка человека) 5×106cells / бутылка ×2

C918 (клетки меланомы человеческого глаза) 5×106cells / бутылка ×2

CAL - 27 (клетки рака чешуи языка человека) 5×106cells / бутылка ×2

LS 180 (клетки рака толстой кишки человека) 5×106cells / бутылка ×2

CNE - 2Z (клетки носоглотки человека) 5×106cells / бутылка ×2

Набор для тестирования MTTCOLO 201 (клетки рака колоректальной железы человека) 5×106cells / бутылка ×2

CW - 2 (клетки рака толстой кишки человека) 5×106cells / бутылка ×2

CRT (клетки глиомы человека) 5×106cells / бутылка ×2

D283 Med (клетки миелобластомы человека) 5×106cells / флакон ×2

EA.hy926 (клетки слияния пуповинных вен человека) 5×106cells / бутылка ×2

ECV - 304 (эндотелиальные клетки пуповинной вены человека) 5×106cells / бутылка ×2

EJ (раковые клетки мочевого пузыря человека) 5×106cells / бутылка ×2

H - 97 (клетки рака печени с высоким метастазом у человека) 5×106cells / бутылка ×2